分析方法 | 脂質(zhì)體藥物生物樣品分析的挑戰(zhàn)

  脂質(zhì)體藥物指將一種或多種活性成分(API)包載于脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)或(和)內(nèi)水相內(nèi)而形成載藥脂質(zhì)體的一類藥物制劑。
  作為藥物遞送載體，其具備生物相容性良好、在體內(nèi)可被生物降解以及定位靶向性強等優(yōu)點，在一定程度上改善某些藥物在人體內(nèi)的藥代動力學(xué)行為及藥效，減輕不良反應(yīng)。
  目前中國已經(jīng)上市的脂質(zhì)體藥物有注射用鹽酸多柔比星、紫杉醇、兩性霉素B、鹽酸伊利替康脂質(zhì)體注射液等。
  脂質(zhì)體藥物進入人體后，會釋放游離型藥物，因而體內(nèi)會同時存在負載型藥物和游離型藥物。負載型藥物是藥物的貯庫,游離型藥物與藥效和不良反應(yīng)有關(guān)。
  因此，針對傳統(tǒng)劑型進行血漿總濃度分析的藥代動力學(xué)研究是不夠合適的，甚至可能對脂質(zhì)體藥物產(chǎn)生誤導(dǎo)。在進行脂質(zhì)體藥物藥代動力學(xué)研究時，需要分別測定血液中游離型藥物和負載型藥物的濃度。
  游離型藥物：從脂質(zhì)體中釋放出來的藥物，在體內(nèi)主要以游離和血漿蛋白結(jié)合兩種形態(tài)存在
  負載型藥物：存在于脂質(zhì)體中未被釋放的藥物
  總藥物：游離型藥物+負載型藥物
  脂質(zhì)體藥物在進入體內(nèi)后，活性藥物一般會以游離型與負載型藥物的形式存在，進行生物樣本分析時需要對二者進行有效分離。分離生物樣本中游離型/負載型藥物的常用方法包括平衡透析、超速離心、超濾、固相萃取、排阻色譜等。選取的分離方法應(yīng)防止脂質(zhì)體制劑在分離的過程中發(fā)生泄漏或破裂。
  對于體內(nèi)游離型或負載型藥物的測定主要包括直接法與間接法。
  直接法：分別測定游離型藥物和負載型藥物，更能準(zhǔn)確體現(xiàn)暴露量。
  間接法：測定總藥物濃度和游離型藥物濃度，取二者差值即為負載型藥物濃度。
  與普通藥物相比在生物樣本檢測方法建立過程中，游離型和負載型藥物的分離以及如何保證含有脂質(zhì)體的生物樣本在儲存、前處理過程中的穩(wěn)定是方法開發(fā)過程中所面臨的挑戰(zhàn)。由此而涉及到的校正標(biāo)樣及質(zhì)控樣本的制備、基質(zhì)效應(yīng)、選擇性、回收率、穩(wěn)定性甚至離心轉(zhuǎn)速等方面的考察，都與普通藥物有著不同的考量。
  1-游離型和負載型藥物分離方式選擇
  選用合適的分離方法是負載藥物和游離藥物準(zhǔn)確測定的先決條件。樣品分離方法應(yīng)滿足：
  ·快速、簡單，可用于高通量分析
  ·可有效分離各組分，以保證定量的準(zhǔn)確性
  ·避免或減少脂質(zhì)體在樣品制備和儲存過程中泄漏出藥物
  ·去除血漿中內(nèi)源性基質(zhì)的干擾
  超濾法
  原理：游離藥物通過超濾膜，而大分子的脂質(zhì)體藥物被保留在上腔室中。分離效果取決于選擇濾膜濾孔的大小。
  適用范圍：蛋白結(jié)合率低的親水性化合物。
  優(yōu)勢：超濾過程簡單明了、操作準(zhǔn)確度高?？梢允占獫{后立即在現(xiàn)場直接進行，從而消除脂質(zhì)體在血漿樣品中長期保存和凍融帶來穩(wěn)定性問題的影響。
  弊端：藥物可能被吸附到超濾裝置上，造成準(zhǔn)確度的降低。
  原理：填料與化合物的相互作用將游離藥物保留在填料中，從而區(qū)分游離藥物和負載藥物。
  適用范圍：待測物能夠被固相填料吸附，且脂質(zhì)體雙分子層表面組分不與固相填料發(fā)生作用，能夠順利通過填料顆粒間的空隙流出。
  優(yōu)勢：可同時分析游離藥物和負載藥物。
  弊端：該操作復(fù)雜、成本較高，需解決脂質(zhì)體在血漿樣品長期保存和凍融帶來穩(wěn)定性問題的影響。
  脂質(zhì)體的穩(wěn)定性與多種因素相關(guān)，如pH、溫度、共存化合物、滲透壓、凍融次數(shù)等。在游離型藥物檢測時，脂質(zhì)體在儲存及樣品處理過程中的穩(wěn)定性十分關(guān)鍵。
  如在上述過程無法保持脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，在采集樣本后，應(yīng)及時對其進行處理，如加入防凍劑、控制溫度、PH值、緩沖液濃度等或?qū)⒅|(zhì)體釋放的游離型和負載型藥物進行分離后再分別進行貯存，以避免在冷凍貯存過程中脂質(zhì)體發(fā)生破裂，干擾后續(xù)脂質(zhì)體藥物不同組分的測定。
  3-離心轉(zhuǎn)速
  全血在離心制備血漿樣本過程中可能存在脂質(zhì)體在血漿中分布不均的現(xiàn)象。因此需要考察離心力對脂質(zhì)體分層和滲漏的影響?？赏ㄟ^對不同離心力下血漿中脂質(zhì)體和游離藥物的峰面積的差異測定來判定脂質(zhì)體的均一性是否受到影響，從而選擇合適的離心力進行血漿樣本的制備。另外，脂質(zhì)體可能在渦旋混合的過程中發(fā)生滲漏，因此在制劑的配制過程中需要輕緩，盡可能低轉(zhuǎn)速混合樣本或者加入防振搖保護劑。
  4-負載型藥物分析
  為了檢測負載型藥物中被脂質(zhì)體包裹的藥物，需要使脂質(zhì)體破裂以釋放藥物。脂質(zhì)體破封可以通過添加有機溶劑、去污劑、pH調(diào)節(jié)劑或提高溫度等來進行。
  5-質(zhì)控樣品的設(shè)計
  因為脂質(zhì)體樣品的不同成份可能會相互影響，為了使生物分析方法準(zhǔn)確進行定量，應(yīng)在適當(dāng)?shù)幕|(zhì)中制備校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)樣品，質(zhì)控樣品應(yīng)模擬所產(chǎn)生樣品的組成?？梢酝ㄟ^將脂質(zhì)體和游離藥物分別加到血漿中來配制負載型藥物和游離型藥物的校準(zhǔn)曲線，質(zhì)控樣品應(yīng)同時包含負載型藥物和游離型藥物，以便充分評估這兩種成分之間的相互影響。
  硬件設(shè)施俱全
  晶易醫(yī)藥生物分析服務(wù)平臺專有實驗場地面積超1300㎡，配備多套LC-MS/MS、GC-MS/MS、ICP-MS、LOGAN全自動透皮擴散系統(tǒng)、高速離心機等。

  質(zhì)量體系完善
  實驗室按照CNAS-CL01等認(rèn)可文件建立了完善的管理體系，全流程“無紙化”辦公，數(shù)據(jù)監(jiān)管可溯源。
  項目經(jīng)驗豐富
  ”722”之后，完成生物樣本檢測項目數(shù)量400+項，有使用SPE法和超濾法兩種前處理方式，完成鹽酸伊立替康、多柔比星、奧沙利鉑等多個脂質(zhì)體臨床前體內(nèi)藥代動力學(xué)研究的項目經(jīng)驗。項目團隊具備豐富的脂質(zhì)體藥物研究經(jīng)驗，也希望能為更多的脂質(zhì)體藥物研究賦能，服務(wù)于更多的制藥公司和研發(fā)機構(gòu)，縮短研發(fā)周期、加快藥物上市、造福更多的病患。
  脂質(zhì)體制劑組分復(fù)雜，在生物分析方法建立過程中存在不小的挑戰(zhàn)。但始終離不開一個原則，即找到合適的分離方法區(qū)分游離型和負載型藥物，并避免在整個分析測樣周期過程中脂質(zhì)體藥物泄漏或釋放，從而影響測定結(jié)果。